全自動環(huán)氧乙烷滅菌柜_EO氣體消毒

目的

測定環(huán)氧乙烷滅菌器(下簡稱滅菌器) 對細(xì)菌芽孢的殺滅能力，以驗(yàn)證其滅菌性能是否符合原設(shè)計規(guī)定。

試驗(yàn)器材

(1) 枯草桿菌黑色變種( ATCC 9372 )芽孢菌片。

含菌量要求為5 ×10cfu/片～5 × 10cfu/片(按活菌培養(yǎng)計數(shù)結(jié)果計)。在環(huán)氧乙烷量為600mg/L±30mg/L，溫度為54℃±2℃，相對濕度為60%±10% 條件下，菌片上芽孢存活時間應(yīng)≥7.8min，殺滅時間≤58min，D值為2.6min～5.8min。

(2) 染菌載體( 10mm × 10mm ，以布片為代表，必要時可隨滅菌對象，增用或改用其他載體。

(3) 聚乙烯塑料袋( 封裝菌片用，大小為60mm× 40mm ，厚0.2mm～0.4mm )。

(4) 活菌培養(yǎng)計數(shù)所需器材(見2.1.1.3 )。

(5) 使用說明書中規(guī)定滅菌器可處理的物品(裝填滅菌器，使達(dá)滿載要求)。

全自動環(huán)氧乙烷滅菌柜_EO氣體消毒

操作程序

(1) 根據(jù)試驗(yàn)要求，制備枯草桿菌黑色變種芽孢懸液和菌片。菌片放入雙層聚乙烯塑料袋內(nèi)密封包裝，每袋2片。每次試驗(yàn)用20袋。

(2) 將滅菌器上、中、下3層，每層內(nèi)、中、外各設(shè)一點(diǎn)，共設(shè)9點(diǎn)。每點(diǎn)物品中間布放1袋，共需18袋試驗(yàn)菌片。另將一袋（2片）菌片放置在室溫條件下作為陽性對照。

(3) 按使用說明書所規(guī)定的環(huán)氧乙烷濃度、作用時間、柜內(nèi)的溫度和相對濕度，在滿載條件下進(jìn)行環(huán)氧乙烷滅菌處理。滿載用物品，隨滅菌器用途而定。處理完畢，取出菌片，分別移種于5 ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中，置37℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，7d后觀察結(jié)果(定性培養(yǎng)檢測)。

對難以判斷結(jié)果的營養(yǎng)肉湯管，取其中0.2ml懸液接種營養(yǎng)瓊脂平板，用無菌L棒涂抹均勻，置37℃ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。48h后涂片染色，顯微鏡下觀察菌落形態(tài)，或進(jìn)一步做其他試驗(yàn)，判斷有無生長或生長的是否為試驗(yàn)菌。若為非試驗(yàn)菌，則應(yīng)重新進(jìn)行試驗(yàn)。

(4) 測試中，應(yīng)同時設(shè)立定性和定量陽性對照組與陰性對照組。

(5) 定量陽性對照組，以同批試驗(yàn)用菌片置室溫下，待消毒或滅菌試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時間后，立即將該菌片2片分別放入含5.0mlPBS試管中，各振敲打80次。取洗液按2.1.1.3 所示方法進(jìn)行活菌培養(yǎng)計數(shù)。

(6) 定性陽性對照組，以同批試驗(yàn)用菌片置室溫下，待滅菌試驗(yàn)組達(dá)規(guī)定作用時間后，立即將該菌片2 片，分別接種于5.0ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，放入溫箱中作定性培養(yǎng)，觀察有細(xì)菌生長情況。

(7) 陰性對照組，以同批次試驗(yàn)用未染菌樣片2 片，分別接種于5.0ml 營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基，同時將未接種過的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基放入培養(yǎng)箱中作定性培養(yǎng)，觀察有無細(xì)菌生長。

(8) 試驗(yàn)重復(fù)5 次。

(9)在5次試驗(yàn)中，每次試驗(yàn)中的陽性對照菌片，回收菌量均應(yīng)在5×10cfu/片～5×10cfu/片；定性陽性對照組，細(xì)菌生長良好；陰性對照應(yīng)無菌生長。陽性或陰性對照若有不符合上述要求的結(jié)果，試驗(yàn)作廢，重新進(jìn)行。